Maxima H Minus First Strand cDNA Synthesis Kitsis Kit
Opis
Uwaga! Nastąpiła zmiana nazwy z RevertAid™ Premium First Strand cDNA Synthesis Kit na Maxima® H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit.
Thermo Scientific Maxima H Minus First Strand cDNA Synthesis Kit jest kompletnym systemem do odwrotnej transkrypcji. Zestwa zawiera najnowszą odwrotną transkryptazę Maxima H Minus Reverse Transcriptase (RT).
Maxima H Minus Reverse Transcriptase (RT) została stworzona na drodze ewolucji in vitro M-MuLV RT.
Enzym posiada aktywność polimerazy DNA- i RNA- zależnej bez aktywności RNAzy H. Enzym wyróżnia się znacząco podwyższoną termostabilnością, 50x wyższą procesywnością ,wytrzymałością oraz podwyższonym stopniem syntezy w porównaniu z dzikim typem M-MuLV RT.
Wyeliminowana za pomocą mutacji aktywność RNazy H umożliwia generowanie transkryptów o długości nawet 20 kb. Dzięki wysokiej termostabilności enzym utrzymuje pełną aktywność podczas całego procesu odwrotnej transkrypcji jednocześnie produkując duże ilości cDNA. W celu poprawienia wydajności transkrypcji regionów RNA z dużą ilością drugorzędowych struktur lub aby poprawić specyficzność w reakcji ze specyficznymi starterami, temperatura reakcji może być podniesiona nawet do 65°C. Dzięki wysokiej procesywności enzym Maxima H Minus jest wyjątkowo odporny na popularne inhibitory takie jak guanidyna, formamid oraz etanol. Zestaw zawiera zarówno oligo(dT)18 jak i losowe heksamery.
Charakterystyka Maxima H Minus Reverse Transcriptase
- Termostabilna – 90% aktywności po inkubacji w 50°C przez 60 minut w mieszaninie reakcyjnej.
- Aktywna w przedziale temperatury 45-65°C.
- Duża ilość pełnej długości produktu cDNA (nawet do 20 kb).
- Wysoka czułość – powtarzalna synteza cDNA przy szerokim zakresie ilości całkowitego RNA (od 1 pg do 5 µg).
- Wydajna – kompletna synteza cDNA w przeciągu 15-30 min.
- Podwyższona odporność na popularne inhibitory reakcji.
- Przyłącza modyfikowane nukleotydy.
Zastosowanie
- Synteza pierwszej nici cDNA do RT-PCR.
- Konstrukcja bibliotek cDNA.
- Tworzenie sond do hybrydyzacji.
- Synteza antysensownego RNA.
Skład
- Maxima H Minus Enzyme Mix zawiera Maxima H Minus Reverse Transcriptase oraz RiboLock RNase Inhibitor. RiboLock RNase Inhibitor efektywnie chroni matrycę RNA przed degradacją przez RNazy A, B oraz C w temperaturze do 55°C.
- Oligo(dT)18 oraz random hexamer primers. Losowe heksamery przyłączają się niespecyficznie i są wykorzystywane do syntezy cDNA ze wszystkich cząsteczek RNA. Oligo(dT)18 przyłączają się specyficznie do końca 3’ poly(A) RNA syntetyzując cDNA wyłącznie z mRNA zakończonych ogonkiem poly(A). Oprócz tego z zestawem można użyć startery specyficzne do konkretnego genu.
- 10 Mm dNTP mix.
- 5X RT Buffer.
- Woda wolna od nukleaz.
Porównanie właściwości odwrotnych transkryptaz dostępnych w firmie (Thermo Scientific) Fermentas
Odwrotna transkryptaza | Optymalna temp. reakcji | Aktywna do temp. | Długość odczytu | Aktywność RNase H | Inaktywacja | Units/20 µl reakcji | Czułość (RNA całkowite) |
Maxima H Minus Reverse Transcriptase | 50-55°C | 65°C | 20 kb | - | 85°C, 5 min | 200 u | 1pg |
Maxima™ Reverse Transcriptase | 50-55°C | 65°C | 20 kb | + | 85°C, 5 min | 200 u | 1 pg |
RevertAid™ Premium Reverse Transcriptase | 50-55°C | 60°C | 20 kb | – | 85°C, 5 min | 200 u | 1 pg |
RevertAid™ H Minus Reverse Transcriptase | 42-45°C | 55°C | 13 kb | – | 70°C, 10 min | 200 u | 0.1 ng |
RevertAid™ Reverse Transcriptase | 42°C | 50°C | 13 kb | + | 70°C, 10 min | 200 u | 0.1 ng |
M-MuLV Reverse Transcriptase | 37°C | 45°C | 9 kb | + | 70°C, 10 min | 40 u | 100 ng |
Dane techniczne
Opakowanie | 20 react. |