Maxima H Minus Reverse Transcriptase
Opis
Thermo Scientific Maxima H Minus Reverse Transcriptase (RT) została stworzona na drodze ewolucji in vitro M-MuLV RT.
Enzym posiada aktywność polimerazy DNA- i RNA- zależnej bez aktywności RNAzy H. Enzym wyróżnia się znacząco podwyższoną termostabilnością, 50x wyższą procesywnością ,wytrzymałością oraz podwyższonym stopniem syntezy w porównaniu z dzikim typem M-MuLV RT.
Wyeliminowana za pomocą mutacji aktywność RNazy H umożliwia generowanie transkryptów o długości nawet 20 kb. Dzięki wysokiej termostabilności enzym utrzymuje pełną aktywność podczas całego procesu odwrotnej transkrypcji jednocześnie produkując duże ilości cDNA. W celu poprawienia wydajności transkrypcji regionów RNA z dużą ilością drugorzędowych struktur lub aby poprawić specyficzność w reakcji ze specyficznymi starterami, temperatura reakcji może być podniesiona nawet do 65°C. Dzięki wysokiej procesywności enzym Maxima H Minus jest wyjątkowo odporny na popularne inhibitory takie jak guanidyna, formamid oraz etanol.
Charakterystyka
- Termostabilna – 90% aktywności po inkubacji w 50°C przez 60 minut w mieszaninie reakcyjnej.
- Aktywna do temperatury 65°C.
- Duża ilość pełnej długości produktu cDNA (nawet do 20 kb).
- Wysoka czułość – powtarzalna synteza cDNA przy szerokim zakresie ilości całkowitego RNA (od 1 pg do 5 µg).
- Wydajna – kompletna synteza cDNA w przeciągu 15-30 min.
- Podwyższona odporność na popularne inhibitory reakcji.
- Przyłącza modyfikowane nukleotydy.
Zastosowanie
- Synteza pierwszej nici cDNA do RT-PCR oraz real-time RT-PCR.
- Odwrotna transkrypcja przy podwyższonej temperaturze, aby zredukować efekty struktur drugorzędowych.
- Synteza cDNA do klonowania i ekspresji.
- Tworzenie znakowanych sond cDNA do mikromacierzy.
- Analiza RNA poprzez wydłużanie starterów.
Skład
Maxima H Minus Reverse Transcriptase dostarczana wraz z 5X RT Buffer (250 mM Tris-HCl (pH 8.3 at 25°C), 375 mM KCl, 15 mM MgCl2, 50 mM DTT).
Porównanie właściwości odwrotnych transkryptaz dostępnych w firmie Thermo Scientific (Fermentas)
Odwrotna transkryptaza | Optymalna temp. reakcji | Aktywna do temp. | Długość odczytu | Aktywność RNase H | Inaktywacja | Units/20 µl reakcji | Czułość (RNA całkowite) |
Maxima H Minus Reverse Transcriptase | 50-55°C | 65°C | 20 kb | - | 85°C, 5 min | 200 u | 1pg |
Maxima™ Reverse Transcriptase | 50-55°C | 65°C | 20 kb | + | 85°C, 5 min | 200 u | 1 pg |
RevertAid™ Premium Reverse Transcriptase | 50-55°C | 60°C | 20 kb | – | 85°C, 5 min | 200 u | 1 pg |
RevertAid™ H Minus Reverse Transcriptase | 42-45°C | 55°C | 13 kb | – | 70°C, 10 min | 200 u | 0.1 ng |
RevertAid™ Reverse Transcriptase | 42°C | 50°C | 13 kb | + | 70°C, 10 min | 200 u | 0.1 ng |
M-MuLV Reverse Transcriptase | 37°C | 45°C | 9 kb | + | 70°C, 10 min | 40 u | 100 ng |
Dane techniczne
Opakowanie | 10000 U |