MuSeek NGS Kit Ion Torrent

Zestaw Thermo Scientific MuSeek Library Preparation Kit for Ion Torrent™ jest przeznaczony do tworzenia wysokiej jakości bibliotek genowych do sekwencjonowania. Metoda wykorzystuje transpozony i pozwala na jednoczesną enzymatyczną fragmentację i tagowanie docelowego DNA. Pozwala to na eliminację dodatkowego etapu fragmentacji DNA, konwersji końców, czy też ligacji adapterów. W konsekwencji cały protokół zajmuje nie więcej niż 80 min. wystarczy 100 ng próbki DNA, aby stworzyć bibliotekę fragmentów o długości 10-400 pz.

Właściwości:

• Kompatybilny z systemem Ion Personal Genome Machine™ (PGM™).
• Krótki protokół – mniej niż 80 min.
• Łatwy w użyciu.
• Uniwersalny – jeden protokół do konstrukcji bibliotek różnych rozmiarów.

Reakcja fragmentacji i tagowania katalizowana jest przez kompleks transpozazy MuA (białko o masie 75 kDa pochodzące z bakteriofaga Mu) posiadający dwa dwuniciowe końce DNA z sekwencją specyficzną dla MuA.
W pierwszej fazie genomowe DNA jest jednocześnie dzielone na fragmenty i oznakowywane sekwencjami transpozonów na każdym końcu każdego fragmentu. Następnie końce 3’ są wydłużane ponad 5-cio nukleotydowe przerwy wygenerowane podczas reakcji transpozycji. Do fragmentów dodawane są specyficzne adaptery z wykorzystaniem reakcji PCR.

Skład zestawu

• MuSeek Enzyme Mix
• MuSeek Fragmentation Reaction Buffer
• MuSeek Stop Solution
• Control DNA
• MuSeek Adaptor Addition Primer Mix
• MuSeek Adaptor Addition Reaction Buffer
• Phusion Hot Start II High-Fidelity DNA Polymerase
• MuSeek Sequencing Primer