Phusion Site-Directed Mutagenesis Kit

Zestaw do ukierunkowanej mutagenezy ‘Phusion^® Site-Directed Mutagenesis Kit’ (Thermo Scientific) jest uniwersalnym i wydajnym narzędziem do wprowadzania mutacji punktowych, insercji lub delecji w każdym rodzaju plazmidowego DNA. Cały plazmid jest amplifikowany z wykorzystaniem fosforylowanych starterów, które wprowadzają pożądane zmiany. Namnożony, liniowy produkt PCR, zawierający pożądane mutacje poddawany jest cyrkularyzacji w 5-cio minutowej reakcji ligacji z wykorzystaniem ligazy typu Quick T4 DNA Ligase. Uzyskanym kolistym plazmidem można transformować dowolne kompetentne komórki E. coli.

• Wydajna i niezawodna metoda amplifikacji,
• Brak dodatkowych wymagań dotyczących: dedykowanych wektorów, konkretnych miejsc restrykcyjnych czy statusu metylacji dla docelowego plazmidu,
• Minimalizacja ryzyka niepożądanych mutacji drugorzędowych ze względu na wysoką wierność namnażania polimerazy Phusion® Hot Start II,
• Aktywność hot start polimerazy zapobiega amplifikacji niespecyficznych produktów i niepożądanej degradacji starterów,
• Amplifikacja dużych plazmidów do 10 kb,
• Ligaza Quick T4 DNA Ligase zawarta w zestawie nie wymaga etapu oczyszczania produktu przed i po ligacji,
• Zestaw kompatybilny ze wszystkimi kompetentnymi szczepami E. coli.

Zestaw Phusion® Site-Directed Mutagenesis Kit zawiera:

polimerazę (Phusion Hot Start II DNA Polymerase), bufor (5x Phusion HF Buffer), deoksynukleotydy (dNTP mix), ligazę (Quick T4 DNA Ligase (NEB)), bufor dla ligazy (2x Quick Ligation Buffer (NEB)) oraz plazmid i startery kontrolne.

Protokół