T4 DNA Ligase
Opis
Stężenie 5 u/µl
Ligaza T4 DNA katalizuje tworzenie wiązań fosfodiestrowych pomiędzy zestawionymi końcami 5’forsforanowymi i 3’-hydroksylowymi w dupleksach DNA lub RNA. Enzym naprawia pojedyncze nacięcia w dupleksach DNA, RNA lub hybrydach RNA/DNA poprzez łączenie spójnych lub tępych końców DNA. Nie posiada jednak aktywności na jednoniciowych kwasach nukleinowych.Ligaza T4 DNA wymaga ATP jako kofaktora.
- Szybka – ligacja lepkich końców w 10 min.
- 100% aktywności w buforach do enzymów restrykcyjnych, PCR oraz RT ,
- Dostarczana wraz z buforem reakcyjnym zawierającym ATP oraz 50% PEG dla wydajnej ligacji tępych końców.
Inhibitory
Ligaza T4 DNA jest silnie inhibowana przez NaCl lub KCl jeżeli stężenie przekracza 200 mM.
Inaktywacja
Inaktywacja w temperaturze 65°C przez 10 min. lub w 70°C przez 5 min.
Uwagi:
- Przyłączenie ligazy do DNA może spowodować przesunięcie prążków podczas elektroforezy. Aby tego uniknąć inkubuj próbki z 6X DNA Loading Dye & SDS Solution (#R1151) przez 65°C przez 10 min. lub w 70°C przez 5 min., a następnie schłodź na lodzie przed elektroforezą.
- Objętość mieszaniny reakcyjnej podczas procedury transformacji nie powinna przekraczać 10% objętości komórek kompetentnych.
- Przed elektroporacją usuń ligazę z mieszaniny reakcyjnej za pomocą kolumienek oczyszczających lub ekstrahuj chloroformem, a następnie precypituj etanolem.
Bufor do przechowywania:
20 mM Tris-HCl (pH 7.4); 1 mM DTT;50mM KCl; 0.1mM EDTA i 50% glicerol.
Bufor reakcyjny (#B69)
400 mM Tris-HCl, 100 mM MgCl2, 100 mM DTT, 5 mM ATP (pH 7.8 w 25°C)
Źródło:
Komórki E.coli z wklonowanym genem 30 bakteriofaga T4
Dane techniczne
Opakowanie | 1000 U |