Midori Green Advance DNA Stain

Wszystkie barwniki z rodziny Midori Green DNA Stain są:

• bezpieczna i równie czuła alternatywa dla karcerogennego bromku etydyny
• nietoksyczne i niekancerogenne -  na podstawie wyników testu Ames stwierdzono, że powoduje znacznie mniej mutacji niż bromek etydyny. mogą być bezpiecznie usuwane do sieci kanalizacyjnej
• emitują zielone światło po związaniu z DNA lub RNA
• kompatybilne z wieloma urządzeniami wizualizującymi
• 1 ml wystarcza do wybarwienia 25 l agarozy!

Midori Green Advance cechuje się wyjątkową czułością w stosunku do bardzo małych fragmentów oraz niskim poziomem tła. Procedura barwienia żeli odbywa się analogicznie do bromku etydyny -  wystarczy dodać 4 - 6 µl barwnika na 100 ml agarozy. Możliwość późniejszego wybarwienia żelu w buforze zawierającym barwnik. Roztwór do wybarwiania może być użyty 2-3 krotnie przy zachowaniu odpowiednich warunków przechowywania (zaciemnione miejsce, temperatura pokojowa). Wówczas używa się 10-25 µl Midori Green Advance na 100ml buforu. Optymalny czas barwienia wynosi 5-60 minut w zależności od grubości żelu.

Midori Green advance emituje zielone światło po związaniu z DNA lub RNA. Posiada dwa drugorzędowe szczyty ekscytacji (~270 nm, 290 nm) oraz jeden silny ~ 490 nm. Emisja fluorescencji następuje w obrębie ~530 nm, dzięki temu Midori Green DNA Stain jest kompatybilny z wieloma urządzeniami wizualizującymi.  

Porównanie czułości bromku etydyny (po lewej) oraz Midori Green (po prawej) przy użyciu transiluminatora UV. Zdjęcie dostarczone przez użytkownika: p. Abel, Heinrich-Heine-University Düsseldorf; Germany.

Uwagi:

• 1 ml Midori Green Advance wystarcza na około 17-25 L żelu agarozowego.
• Żel powinien mieć grubość < 0,5 cm
• Wielokrotne roztapianie żelu może mieć wpływ na czułość barwnika.

Procedura

Barwienie przed elektroforezą

• Przygotuj 100 ml roztworu żelu agarozowego (stężenie 0.8-3.0%) i podgrzej do momentu aż roztwór będzie całkowicie klarowny, bez widocznych, pływających kłaczków.
• Dodaj 4-6 µl of Midori Green DNA Stain do roztworu żelu i delikatnie zamieszaj.
• Roztwór żelu należy schłodzić do 50-60ºC, a następnie wylać na tackę.
• Kiedy żel się zestali, nałóż próbki i przeprowadź elektroforezy.
• Uwidocznij prążki w transiluminatorze UV.
• Do zdjęcia zaleca się użycie żółtych lub zielonych filtrów żelatynowych lub celofanowych.

Barwienie po elektroforezie

• Przygotowany roztwór może być 3-krotnie wykorzystany do barwienia. Roztwór barwiący do ponownego użycia powinien być przechowywany w ciemności, w temperaturze pokojowej.
• Dla 0,5 mm żelu najlepiej użyć 10-25 µl barwnika rozpuszczonego w 100 ml buforu.
• Optymalny czas barwienia wynosi 5-60 minut. Ilość użytego barwnika zależy od grubości żelu i stężenia agarozy. 

Green Technology Transilluminators and Systems Brochure - POBIERZ 

Kompatybilność