
CloneJET™ PCR Cloning Kit
Opis
Zaawansowany system pozytywnej selekcji do wysocewydajnego klonowania produktów PCR wygenerowanych przez każdą polimerazę.Wektor do pozytywnej selekcji pJET1.2/blunt posiada letalny gen blokowany przez wprowadzany insert dzięki czemu tylko plazmidy zrekombinowane są dalej propagowane. Dla wygody przy mapowaniu i innych manipulacjach insertem wektor pJET1.2/blunt posiada miejsce wielokrotnego klonowania ograniczone z dwóch stron miejscami cięć dla BglII. Dodatkowo wektor posiada promotor T7 do transkrypcji insertu in vitro.
Właściwości:
- Szybki - klonowanie produktów PCR w 5 min.
- Najwyższa wydajność - więcej niż 99% pozytywnie wklonowanych insertów.
- Brak tła - wektor pozytywnej selekcji.
- Uniwersalny - odpowiedni do klonowania zarówno lepkich jak i tępych końców fragmentów DNA z/ bez fosforanów 5'.
- Ekonomiczny - nie wymaga późniejszej selekcji kolonii.
- Dogodny wektor pJET1.2:
- gotowy do użycia: zlinearyzowany, tępo zakończony, zawiera - grupy fosforylowe 5',
- MCS zaprojektowane do łatwego mapowania i klonowania,
- promotor T7 do transkrypcji insertu in vitro,
- dwa miejsca cięcia dla enzymu BglII ograniczające MCS.
Zastosowanie:
- Klonowanie tępych końców produktów PCR wygenerowanych przez Pfu lub inne proofreading polimerazy DNA.
- Klonowanie produktów PCR z końcami 3'-dA.
- Klonowanie fragmentów DNA wygenerowanych przez cięcie enzymami restrykcyjnymi.
- Sekwencjonowanie klonowanych fragmentów DNA.
- Transkrypcja in vitro klonowanych fragmentów.
Procedura | Tępy produkt PCR | Produkt PCR z końcem 3’-dA |
Tępienie | - | 5 min. |
Ligacja | 5 min. | 5 min. |
Czas całkowity | 5 min. | 10 min. |
Uwaga:
Przed elektroporacją zawsze oczyszczaj mieszaninę ligacyjną na kolumienkach lub ekstrahuj chloroformem. Elektroporacja jest inhibowana przez obecność soli i białek.
Skład zestawu:
- pJET1/blunt Cloning Vector
- T4 DNA Ligase
- 2X Reaction Buffer
- DNA Blunting Enzyme
- pJE1.2 Forward Sequencing Primer
pJE1.2 Reverse Sequencing Primer - Control PCR Product
- Water, nuclease-free
- Protocol
Dane techniczne
Opakowanie | 40 react. |