FastAP™ Thermosensitive Alkaline Phosphatase

nr kat.: EF0654

Opakowanie: 300 U

Cena brutto: do wyceny

ilość

szt.

towar niedostępny

dodaj do przechowalni

Producent:

nr kat.: EF0654

Opis

Sprawdź także gotowy do użycia Speedy NZY ExoSAP Mix MB47401 lub z niebieskim obciążnikiem Speedy NZY Blue ExoSAP Mix MB48901

************************************************************************************************************************************************************************************************

FastAP™ Thermosensitive Alkaline Phosphatase jest aktywna we wszystkich buforach zarówno do PCR jak i dla enzymów restrykcyjnych.
Enzym defosforyluje wszystkie typy końców DNA w 10 min. w 37 stopniach C. Ze względu na inaktywację w 75 stopniach C (5 min.), nie potrzebne jest usuwanie enzymu przed ligacją.

Właściwości:

Szybka defosforylacja: 10 min w 37°C.
Szybka termiczna inaktywacja: 5 min w 75°C.
Aktywna w buforach dla enzymów restrykcyjnych oraz PCR.
Jeden protokół dla wszystkich rodzajów końców DNA.
Aktywna w stosunku do nukleotydów.

Zastosowanie

Defosforylacja wektorów do klonowania DNA w celu uniknięcia recyrkulizacji w trakcie ligacji.
Jednoczesne trawienie i defosforylacja wektorów DNA.
Oczyszczanie produktów PCR: degradacja nukleotydów w celu dalszego sekwencjonowania.
Defosforylacja końca 5’ kwasu nukleinowego w celu znakowania kinazą polinukleotydową T4.
Inne aplikacje gdzie niezbędna jest defosforylacja DNA lub RNA.

Przykładowe protokoły zastosowań

Oczyszczanie mieszaniny PCR przed sekwencjonowaniem

Procedura ta ma na celu usunięcie niewykorzystanych starterów oraz nukleotydów. Uzyskane w ten sposób produkty PCR są gotowe do sekwencjonowania i nie wymagają już dalszego oczyszczania np. na kolumnach.

1. Przygotuj następującą mieszaninę:

Mieszanina PCR (bezpośrednio po zakończeniu PCR)	5 µl
Exonuclease I (EN0581/ EN0582)	0.5 µl (10 u)
FastAP™ Thermosensitive Alkaline Phosphatase	1 µl (1 u)

2. Dobrze wymieszaj, a następnie przeprowadź inkubację w 37°C przez 15 minut.

3. Zatrzymaj reakcję poprzez inkubację w 85°C przez 15 min.

Uwagi:

Do 5 µl oczyszczonych produktów PCR może być wykorzystane do reakcji sekwencjonowania bez dalszego oczyszczania.
Aby wyniki sekwencjonowania były rzetelne w mieszaninie nie powinno być niespecyficznych produktów PCR.
Protokół może być użyty do oczyszczania produktów PCR wygenerowanych przez każdą termofilną polimerazę DNA lub mieszaninę polimeraz.
Procedura nie jest polecana do dalszych aplikacji związanych z klonowaniem.

Usuwanie grup fosforanowych z końców 3’ i 5’ DNA oraz RNA.

Poniższy protokół jest przedstawia przykładową defosforylację ~ 3 kb liniowego wektora DNA.

1. Przygotuj następującą mieszaninę:

Linearne DNA (~3 kb plazmid)	1 µg (~pmol termini)
10X FastAP™ bufor reakcyjny	2 µl
FastAP™ Thermosensitive Alkaline Phosphatase	1 µl (1 u)
Woda	Do 20 µl
Objętość końcowa	20 µl

2. Dokładnie wymieszaj, krotko zwiruj i inkubuj w 37°C przez 10 minut.

3. Zatrzymaj reakcję poprzez inkubację w temperaturze 75°C przez 5 minut.

Uwagi

Aby defosforylacja była wydajna DNA plazmidowe powinno być wolne od zanieczyszczeń RNA i DNA genomowego.

Dane techniczne

Opakowanie

300 U

Produkty powiązane

Exonuclease I (ExoI)

Cena brutto: 0,00 zł

Cena netto: 0,00 zł

Exonuclease I (ExoI)

Cena brutto: 0,00 zł

Cena netto: 0,00 zł