Exonuclease I (ExoI)

nr kat.: EN0582

Opakowanie: 20000 U

Cena brutto: do wyceny

ilość

szt.

towar niedostępny

dodaj do przechowalni

Producent:

nr kat.: EN0582

Opis

Sprawdź także gotowy do użycia Speedy NZY ExoSAP Mix MB47402 lub z niebieskim obciążnikiem Speedy NZY Blue ExoSAP Mix MB48902

************************************************************************************************************************************************************************************************

Egzonukleaza I (ExoI) degraduje jednoniciowe DNA w kierunku 3’=>5’ stopniowo uwalniając deoksyrybonukleozyd 5’-monofosforan i pozostawia nietknięty dinukleotyd 5’.

Nie tnie nici DNA z grupami OH na końcach 3’ blokowanych przez grupy fosforylowe lub acetylowe.

Właściwości

Aktywna w buforach do PCR.

Zastosowanie egzonukleazy Exo I

Usuwanie pozostałości primerów z mieszaniny amplifikacyjnej.
Egzonukleaza I może być użyta jednocześnie z fosfatazą alkaliczną stosowaną w celu eliminacji dNTP. Po inaktywacji enzymów mieszanina amplifikacyjna może być bezpośrednio poddana sekwencjonowaniu DNA.
Usuwanie jednoniciowego DNA zawierającego koniec hydroksyl 3’.
Wykrywanie obecności i analiza jednoniciowych odcinków DNA (ssDNA) z grupą hydroksylową na końcu 3' (łańcuchy DNA, których grupa OH na końcu 3' jest blokowana grupą fosforylowa lub acetylową są oporne na działanie Exonukleazy I).

Przykładowy protokół zastosowania

Oczyszczanie mieszaniny PCR przed sekwencjonowaniem

Procedura ta ma na celu usunięcie niewykorzystanych starterów oraz nukleotydów. Uzyskane w ten sposób produkty PCR są gotowe do sekwencjonowania i nie wymagają już dalszego oczyszczania np. na kolumnach.

1. Przygotuj następującą mieszaninę:

Mieszanina PCR (bezpośrednio po zakończeniu PCR)	5 µl
Exonuclease I (EN0581/ EN0582)	0.5 µl (10 u)
FastAP™ Thermosensitive Alkaline Phosphatase	1 µl (1 u)

2. Dobrze wymieszaj, a następnie przeprowadź inkubację w 37°C przez 15 minut.

3. Zatrzymaj reakcję poprzez inkubację w 85°C przez 15 min.

Uwagi:

Do 5 µl oczyszczonych produktów PCR może być wykorzystane do reakcji sekwencjonowania bez dalszego oczyszczania.
Aby wyniki sekwencjonowania były rzetelne w mieszaninie nie powinno być niespecyficznych produktów PCR.
Protokół może być użyty do oczyszczania produktów PCR wygenerowanych przez każdą termofilną polimerazę DNA lub mieszaninę polimeraz.
Procedura nie jest polecana do dalszych aplikacji związanych z klonowaniem.